ColorQuest XT全自动比色计采用的比色法(colorimetry)是生化检测中很常用的方法,以生成有色化合物的显色反应为基础,通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量。早在公元初古希腊人就曾用五倍子溶液测定醋中的铁。1795年,外人也用五倍子的酒精溶液测定矿泉水中的铁。但是,比色法作为一种定量分析的方法,大约开始于19世纪30~40年代。
ColorQuest XT全自动比色计的的原理
比色法的理论依据是物质的颜色与光的关系,光是一种电磁波,自然是由不同波长(400~700nm)的电磁波按一定比例组成的}昆合光,通过棱镜可分解成红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等各种颜色相连续的可见光谱。如把两种光以适当比例混合而产生白光感觉时,则这两种光的颜色互为补色。当白光通过溶液时,如果溶液对各种波长的光都不吸收,溶液就没有颜色。如果溶液吸收了其中一部分波长的光,则溶液就呈现透过溶液后剩余部分光的颜色。例如,我们看到KMnO4溶液在白光下呈紫色,就是因为白光透过溶液时,绿色光大部分被吸收,而紫色光透过溶液。同理,CuSO4溶液能吸收黄色光,所以溶液呈蓝色。由此可见,有色溶液的颜色是被吸收光颜色的补色。吸收越多,则补色的颜色越深。比较溶液颜色的深度,实质上就是比较溶液对它所吸收光的吸收程度。
朗伯-比尔定律(Beer-Lambert Law),又称比尔定律、比耳定律、布格-朗伯-比尔定律,是光吸收的基本定律,适用于所有的电磁辐射和所有的吸光物质,包括气体、固体、液体、分子、原子和离子。比尔-朗伯定律是吸光光度法、比色分析法和光电比色法的定量基础。光被吸收的量正比于光程中产生光吸收的分子数目 。
物理意义是当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时,其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比,而透光度T与c、b成反比。
比尔-朗伯定律数学表达式
A=lg(1/T)=Kbc
A为吸光度,T为透射比(透光度),是出射光强度(I)比入射光强度(I0).
K为摩尔吸收系数.它与吸收物质的性质及入射光的波长λ有关.
c为吸光物质的浓度,b为吸收层厚度.【b也常用L替换,含义一致】